martes, 17 de noviembre de 2009

INTRODUCCION A QUIMICA SANGUINEA


Dr. Daniel Guardia

QUIMICA CLINICA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES

Espectrofotometría. Principios básicos

Reacciones colorimétricas. Midiendo la intensidad de color se podría conocer la concentración de la sustancia que lo produce. Para ello se aplican técnicas fotométricas, empleando un aparato llamado colorímetro (si mide sólo un determinado color) o espectrofotómetro (si realiza una medida de todo el espectro de colores).
La luz es parte de la radiación electromagnética, que se propaga de forma ondulatoria. Las distintas radiaciones luminosas (los distintos colores) se diferencian unas de otras por sus longitudes de onda (γ (distancia entre la cresta de una onda y la siguiente), que se mide en nm. La luz visible engloba las radiaciones comprendidas entre 380-750 nm, que corresponden a los colores del arco-iris, de tal forma que cada color corresponde a una radiación con una γ específica. El espectrofotómetro dispone de una lámpara que emite luz monocromática, de una longitud de onda determinada, que incide y atraviesa la muestra coloreada a medir, y de un detector, que medirá la cantidad de luz que no es absorbida por la muestra. Para cada sustancia determinada, se utilizará la radiación de longitud de onda a la que absorba más cantidad de luz.
Su funcionamiento de basa en la ley de Beer-Lambert: la fracción de luz incidente que es absorbida por una solución es proporcional a la concentración de soluto y al espesor de la sustancia atravesada por la luz. La relación entre la luz incidente (I0) y la reflejada (I) dará una idea de la cantidad de radiación que ha sido absorbida por la muestra. Es lo que se denomina Absorbancia (Abs) o Densidad Óptica (DO)


La Ley de Beer-Lambert se formula como
Abs (DO) = e x C x l

Siendo e el coeficiente de extinción molar (específico para cada sustancia a una l y en unas condiciones determinadas) (M-1 cm-1), C la concentración de la muestra a medir (M), y l el espesor de la muestra. La mayoría de los espectrofotómetros utilizan cubetas para la muestra de 1 cm de espesor, por lo que l se puede ignorar. Así, la concentración desconocida de la sustancia coloreada será
C = Abs / e

Enzimología clínica

Valor diagnóstico de las enzimas en el plasma
La enzimología clínica es la aplicación del conocimiento de las enzimas (proteínas especializadas en la catálisis de reacciones orgánicas) al diagnóstico, tratamiento y pronóstico de la enfermedad.
Aunque son raras las enzimas exclusivas de un tejido, la alteración de la concentración sérica de un enzima determinada orienta sobre los tejidos más probablemente afectados. Además, muchas enzimas muestran distintas formas moleculares (isoenzimas) características de distintos tejidos. El análisis isoenzimático de la enzima cuya concentración sérica se encuentra alterada a menudo aporta información adicional sobre las causas de dicha alteración.
Muy frecuentemente la información deseada se obtiene examinando dos o más enzimas séricas ej. una elevación en γ-glutamil-transferasa indicará, con gran probabilidad, colestasis si aparece aumentada también la fosfatasa alcalina sérica.
El tipo de alteración observada también proporciona gran información:
· Lo más frecuente es encontrar elevaciones debidas a aumentos de permeabilidad celular daño tisular.
· Es posible detectar disminuciones debidas a enfermedades crónicas que originan disfunción celular.
· El grado de alteración de la concentración catalítica puede ser orientativo de determinadas alteraciones ej. las aminotransferasas séricas muestran aumentos más importantes en hepatitis agudas que en hepatitis crónicas.
Dependiendo del grado de permeabilidad y de la distancia entre células y capilares existirá un mayor o menor desfase entre el momento de detección del aumento de actividad enzimática y el momento de daño tisular.


Principios del análisis de enzimas
La concentración de enzimas en suero es muy baja, sin embargo, dada su eleva capacidad catalítica, es posible determinar su actividad y presuponer que ésta es proporcional a su concentración. Por tanto, el estudio de las enzimas en el laboratorio se basa en la demostración “in vitro” de la actividad catalítica.
Se puede determinar la actividad enzimática analizando:
· La aparición de algún producto
· La desaparición del sustrato
· La variación de un cofactor o de algún componente de la reacción En definitiva, la actividad de una enzima se mide mediante la determinación de la cantidad de sustrato formado por unidad de tiempo, en condiciones exactamente definidas (pH, Tª…) y estrictamente controladas.
La actividad enzimática se expresa Unidades Internacionales (UI) por unidad de volumen (UI/ml, UI/L…) siendo una UI la cantidad de enzima que transforma un micromol de sustrato por minuto en condiciones estándar previamente establecidas.
En una reacción enzimática podemos diferenciar 3 fases: fase de retardo, fase lineal y fase de agotamiento de sustrato.
La fase de retardo tiene lugar inmediatamente después de mezclar los reactivos con la muestra biológica. Es una fase de encuentro y acoplamiento de sustrato y enzima. Su duración es muy variable (segundos a minutos). Al finalizar esta fase comienza la fase lineal en la que la formación de producto permanece constante, siendo la concentración de enzima de la muestra es el único factor limitante. Por último, a medida que va transcurriendo la reacción, llega un momento en que el sustrato u otro reactivo se van agotando (fase de agotamiento de sustrato) y lavelocidad de reacción disminuye hasta anularse.
Para que una determinación enzimática sea válida es necesario realizarla en la fase lineal donde el único factor limitante es la concentración de la propia enzima y las condiciones de reacción son las óptimas (exceso de sustrato y otros reactivos…). Para ello se suele trabajar con una concentración de sustrato superior a la Km. Así, en un ensayo enzimático, el límite de linealidad es la actividad enzimática más alta que se puede medir con exactitud. Por encima de ese valor habrá que diluir el suero con solución salina y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución.
¿Cómo se obtiene en el laboratorio clínico el valor numérico de actividad enzimática?
Generalmente la actividad enzimática se evalúa mediante ensayos espectrofotométricos, por tanto necesitamos seguir la evolución de alguno de los elementos que participan en la reacción y que, por supuesto, deben absorber luz a una determinada longitud de onda así:
• Si el producto absorbe luz a una longitud de onda determinada podemos evaluar la aparición del producto analizando el incremento de absorbancia a dicha longitud de onda.
• Si el sustrato absorbe luz a una longitud de onda determinada podemos evaluar la desaparición del sustrato analizando la disminución de absorbancia a dicha longitud de onda.
• De igual modo podemos analizar la variación de un cofactor o de algún componente de la reacción. Ej. es muy frecuente utilizar la aparición o desaparición de NADH o NADPH, así
NAD+ NADH
NADP+ NADPH
Aumenta la absorbancia a 340nm
NADH NAD+
NADPH NADP+
Disminuye la absorbancia a 340nm
De cualquiera de estas maneras podremos:
· analizar como evoluciona la absorbancia, es decir la reacción, a lo largo del tiempo y obtener un valor de A/min
En ocasiones ninguno de los elementos que participan directamente en la reacción absorben luz, en cuyo caso es necesario acoplar una segunda reacción en la que alguno de los reactivos o productos presenten un máximo de absorción. Analizando esta segunda reacción podremos evaluar la actividad enzimática de la primera.
Los métodos analíticos para determinar la actividad enzimática y por tanto el A/min pueden ser:
· Métodos a punto final
· Métodos cinéticos
En definitiva, ya sabemos la fase en la que hemos de trabajar, que parámetro obtenemos experimentalmente y como lo obtenemos pero ¿cómo convertimos? A/min en UI/L?
Para obtener el valor definitivo de actividad enzimática aplicamos la siguiente fórmula:
Donde:
· e es el coeficiente de extinción molar de aquel compuesto cuya absorbancia estamos siguiendo en el espectrofotómetro.
· b es el espesor de la cubeta
· VF es el volumen total de reacción
· VI es el volumen de muestra en el ensayo
Para un determinado ensayo todos los parámetros mencionados anteriormente son constantes por tanto podemos la fórmula anterior queda como:
UI/L= A/min · cte
Aspectos prácticos
· No utilizar muestras que hayan sido congeladas y descongeladas varias veces.
· Separar lo antes posible el coágulo del suero y evitar trabajar con muestras bemolizadas
· Evitar la estasis venosa prolongada durante la extracción
· Evitar el envejecimiento de las muestras
· El transporte de las muestras debe realizarse en frío sin congelar, salvo que se vaya a prolongar mucho tiempo.
Determinación enzimática de sustratos.
En el laboratorio no sólo se puede determinar la actividad de enzimas de interés clínico, también es muy frecuente utilizar enzimas en la determinación de sustratos ej. métodos enzimáticos (GOD/POD o de la hexoquinasa) para determinar la concentración de glucosa de una muestra.

QUIMICA SANGUINEA
PRUEBAS QUE SE REALIZAN EN LA SECCION DE QUIMICA SANGUINEA
Glicemia
DEFINICION
La glucosa es un hidrato de carbono que constituye la principal fuente de energía del organismo. Su concentración sanguínea se mantiene dentro de estrechos márgenes a lo largo del día, a pesar de los cambios que se producen tras la alimentación y el ayuno, debido a efectos combinados de la insulina, glucagón, cortisol, epinefrina y hormona del crecimiento.
IMPORTANCIA CLINICA
Niveles elevados de glucosa (hiperglicemia) pueden ocurrir en pacientes con neoplasma pancreático, hipertiroidismo, hiperfunción adenoneocortical entre otros desordenes. Niveles disminuidos de glucosa (hipoglicemia) puede resultar de una terapia con insulina excesiva o varias enfermedades del hígado.
La patología asociada más común es la diabetes mellitus, síndrome caracterizado por una secreción anormal de insulina que se refleja en una tendencia a la hiperglicemia, a veces glicosuria y otras manifestaciones vasculares y metabólicas. Mediante un diagnóstico precoz se evita la cetoacidosis.
FUNDAMENTO
La glucosa oxidasa cataliza la oxidación de la glucosa de acuerdo con la reacción siguiente:

Glicose + O2 + H2O Ácido Glucônico + H2O2
el peróxido de hidrógeno formado reacciona con el 4-aminoantipirina y el fenol, bajo acción catalítica del peroxidase, con una reacción del oxidativa del acoplamiento, formando un antipirilquinonimina rojo cuya intensidad del color es proporcional a la concentración de la glucosa en la muestra.
2H2O2 + 4-Aminoantipirina + fenol Antipirilquinonimina + 4H2O
Urea
DEFINICIÓN
La urea es un compuesto que se forma en el hígado y es filtrado y absorbido por los riñones. Constituye la fracción de nitrógeno no proteico en la mayoría de los líquidos biológicos. Este es el principal producto final del metabolismo proteico, de donde se deduce que su concentración sérica se relaciona con la dieta y el metabolismo.
IMPORTANCIA CLÍNICA
La urea es un evaluador de la función renal, ya que aumenta cuando hay insuficiencia renal o necrosis y disminuye en la fibrosis quística, eclampsia y síndrome nefrótico. También es indicador de enfermedad hepática pues su síntesis disminuye ante procesos necróticos del hígado.
FUNDAMENTO
El ensayo es una evaluación cinética en la cual el rango inicial de la reacción es lineal para un periodo limitado de tiempo. La urea presente en la muestra es hidrolizada por la enzima ureasa a amonio y dióxido de carbono. La segunda reacción, catalizada por la glutamato deshidrogenasa (GLD) convierte el amonio y el alfa-ketoglutarato a glutamato y agua con la oxidación subsiguiente de nicotinamida adenina dinucleósido reducida (NADH) a nicotinamida adenina dinucleósido (NAD). Dos moles de NADH son oxidados por cada mol de urea presente. El rango inicial de descenso en la absorbancia a 340 nm es proporcional a la concentración de urea en la muestra.
Creatinina
DEFINICION
La creatinina es un producto de degradación catabólica de la creatina, en el músculo esquelético. Es un compuesto soluble que se elimina únicamente a través del riñón por filtración, por tanto es un indicador directamente proporcional de la función renal, y si ésta es normal el nivel sérico permanecerá constante.
IMPORTANCIA CLINICA
Se encuentra elevada en insuficiencia renal aguda y crónica, glomerulonefritis, pielonefritis, necrosis tubular, obstrucción urinaria, anuria e hipertiroidismo. Disminuye durante el embarazo y cuando hay pérdida de masa muscular.

FUNDAMENTO
A un pH alcalino, la creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato para formar un complejo de creatinina-picrato. La tasa de incremento en la absorbancia a 500 nm, debida a la formación del complejo, es directamente proporcional a la concentraron de creatinina presente en la muestra.
Acido úrico
DEFINICIÓN
El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas.
IMPORTANCIA CLÍNICA
Niveles anormales pueden ser indicativos de un desorden en el metabolismo de purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas. La hiperuricemia puede observarse en disfunción renal, gota, leucemia, policitemias, arterosclerosis, diabetes, hipotiroidismo o en algunas enfermedades genéticas. Niveles inferiores están presentes en pacientes con la enfermedad de Wilson
FUNDAMENTO
La prueba para ácido úrico esta basada en los métodos de Trivedi y Kabasakalian. El ácido úrico es oxidado por uricasas, con la producción de peroxido de hidrogeno ( H2O2). El H2O2 reacciona con 4-aminoantipirina (4-AAP) y 2, 4, 6-tribromo-3-hidróxido ácido benzoico (TBHB) en presencia de peroxidasa. Los resultados en absorbancias de 548 nm son proporcionales a la concentración de ácido úrico de la muestra.
El úrico ácido se determina de acuerdo con las reacciones siguientes:
Uricase
Ácido úrico + O2 + H2O Alantoína + CO2 + H2O2

Peroxidase
2H2O2 + TBHB + 4-aminoantipirina Antipirilquinomina + 4H2O
La intensidad del color rojo formado es directamente proporcional a la concentración de acido úrico ácido en la muestra.
Colesterol total
SIGNIFICADO CLINICO
El gran dilema de la aterosclerosis es que es un proceso silencioso. Es activa en todos los individuos y permanece sin ninguna manifestación por décadas y se manifiesta repentinamente dolor torácico, infarto agudo de miocárdio(IAM) o la muerte súbita. Estudios poblaciónales longitudinales como los de Tecumset, Albany, Framinghan, Evans, Chicago, Oslo entre otros, y también datos epidemiólogos experimentales en animales, han demostrado una correlación positiva entre los niveles del colesterol, más necesariamente del colesterol LDL y del riesgo de IAM. Al mismo tiempo fue evidenciado que los niveles HDL del colesterol, son inversamente proporcionales al riesgo de IAM.
Los valores aumentados de colesterol se encuentran en nefrosis, hipotireoidismo, las enfermedades colestáticas del hígado y en los hiperlipoproteinemias de los tipos IIa, IIb y III.
Los niveles diminuídos se encuentran en el hipertireoidismo, la desnutrición crónica, anemia sideroblástica y talasemia. Las enfermedades hepáticas graves pueden reducir los niveles de colesterol drásticamente.
El nível de colesterol sérico, juntamente con la hipertension arterial y el consumo de cigarrillos, constituyen fatores de riesgo de aterosclerosis e IAM.
FUNDAMENTO
O colesterol total é determinado de acuerdo con las siguientes reacciones:
Colesterol
Ésteres de colesterol Colesterol + Ácidos graxos
Esterase

Colesterol
Colesterol + O2 Colest-4-en-ona + H2O2
Oxidase

Peroxidase
2H2O2 + Fenol + 4-Aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4H2O

A intensidade da cor vermelha formada é diretamente proporcional à concentração de colesterol na amostra.
HDL colesterol
DEFINICIÓN
Es una pequeña partícula constituida por un 50% de proteínas (Apo-A, Apo C, y algo de Apo-E), un 20% de colesterol y un 30% de fosfolipidos. Su función consiste en transportar el colesterol desde los tejidos periféricos hasta el hígado para ser eliminado. Los niveles de HDL se incrementan en quienes realizan ejercicio o consumen cantidades moderadas de alcohol.


SIGNIFICADO CLINICO
La determinación de la concentración sérica del colesterol de la lipoproteína de alta Densida (HDL-C) constituye parte integrante de la evaluación laboratorial del metabolismo lipídico que se estudia para estimar el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria(ECC).
Se encuentra bien establedida la relacion inversa entre a concentracion de HDL-C y ECC. El estudio clásico de Framingham, conducido entre 1969 e 1971, apunto evidências de una fuerte asociacion negativa entre los níveles do HDL-C y la incidência de ECC en hombres y mujeres (com edad superior a 50 anos). Los resultados de diversos estudos clínicos y epidemiológicos han demonstrado que el aumento de 1 mg/dL em la concentracion do HDL-C reduce en 2 a 3% o riesgo de desencadenamiento de ECC.
Las concentraciones del colesterol total y del colesterol HDL dependen de metabolismos distintos no tiene que hacerce ninguna tentativa de buscar la correlación entre sus niveles de la concentración.
FUNDAMENTO
Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y las lipoproteínas de baja densidad (LDL) son cuantitativamente precipitadas, después de la centrifugacion, el colesterol ligado a las lipoproteínas de la alta densidad (colesterol HDL) se determinan en el sobrenadante.
LDL colesterol
DEFINICIÓN
Colesterol ligado a lipoproteínas de baja densidad. El colesterol es un componente de las membranas celulares y un estado inicial para las hormonas esteroides y el ácido vesicular, que es producido por celdas del cuerpo y recibido con el alimento. El colesterol va a transportar en el plasma sobre proteínas de lípidos, complejos de lípidos y apolipoporteinas
IMPORTANCIA CLÍNICA
El colesterol LDL (LDL-C) es conocido como un factor de riesgo independiente para las enfermedades coronarias. Aunque la determinación de colesterol total haya sido utilizada para el seguimiento de hipercolesterolemia, estudios epidemiológicos recientes demostraron la importancia de determinar los niveles sericos de LDL-C para la identificación de pacientes de riesgo elevado.
FUNDAMENTO
La prueba permite medir de forma directa los niveles de LDL-C en suero, a través de un método de eliminación que consta de dos pasos. En el primer paso, quilomicrón, VLDL y HDL se eliminan bajo condiciones específicas, de esta forma queda solo el colesterol que proviene del LDL. De hecho estas fracciones sufren la oxidación (por acción de las enzimas colesterol esterasa y colesterol oxidasa) dando lugar a colestenona y H2O2, degradada posteriormente por la catalasa. En el segundo paso, después de varias reacciones enzimaticas y en presencia de agentes tensoactivos, el LDL-C que ha quedado se puede medir de forma especifica debido a la formación de color (quinona coloreada). La intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de LDL-C presente en la muestra.
Triglicéridos
DEFINICIÓN
Los triglicéridos son un aforra de grasas presentes en el torrente sanguíneo para almacenar energía. Son transportados por lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL). El hígado produce triglicéridos a partir del glicerol y los ácidos grasos.
IMPORTANCIA CLÍNICA
Cuando su nivel es muy alto se depositan en el tejido graso. La determinación de triglicéridos hace parte del perfil lípidico junto con el colesterol y las lipoproteínas, y por tanto es útil para evaluar el riesgo de enfermedad coronaria y vascular periférica. Sus niveles séricos están influenciados por la dieta, el consumo de alcohol, el embarazo, uso de anticonceptivos y algunos fármacos. Se encuentra aumentado en las hiperlipidemias, hipotiroidismo, diabetes descontroladas, riesgo de enfermedad vascular o coronaria, síndrome nefrótico, hipertensión, cirrosis, entre otras.
La determinación de los triglicéridos se lleva a cabo en el laboratorio clínico moderno, porque es tan importante y necesario para la clasificación y el fenotipificacion de hiperlipoproteinaemias. También es importante la estrecha correlación que existe entre la hipertrigliceridemia y aumento del riesgo coronario en las mujeres.Las causas de niveles elevados de triglicéridos son las distintas enfermedades de los lípidos llamado hiperlipidemia o hiperlipoproteinemia. Estos, son de causa primaria o secundaria, la elevación de los triglicéridos en los tipos I, IIb, III, IV y V.La hiperlipidemia puede estar asociada con la enfermedad cardiovascular y ocurre comúnmente en la diabetes, alcoholismo, pancreatitis, enfermedades por almacenamiento de glucógeno, síndrome nefrótico, hipotiroidismo, embarazo, uso de anticonceptivos y el mieloma múltiple y otras enfermedades.Varias mujeres que estaban usando estrógenos o anticonceptivos orales se han incrementado los niveles de triglicéridos. Hipertrigliceremia también está asociado con el uso de diuréticos tiazidas y beta bloqueantes.
FUNDAMENTO
Los triglicéridos son enzimaticamente hidrolizado por lipasa a ácidos grasos libres y glicerol. El glicerol es fosforilado por adenosin difosfato (ADP). Glicerol-3-fosfato es oxidado a dihidrooxiacetona fosfato (DAP) por la fosfato oxidasa (GPO) produciendo peróxido de hidrógeno (H2O2). En una reacción de color catalizada por la peroxidasa el H2O2 reacciona con el 4-aminoantipirina (4-AAP) y el 4-clorofenol (4-CP) para producir un producto de color rojo. La abosrbancia de este compuesto es proporcional a la concentración de triglicéridos presente en la muestra.
Os Triglicérides são determinados de acordo com as seguintes reações:
Lipase da
lipoproteína
Triglicérides Glicerol + Ácidos Graxos
Glicerolquinase
Glicerol + ATP Glicerol-3-Fosfato + ADP
Mg +2
Glicerol-3-fosfato
Glicerol-3-Fosfato + O2 Dihidroxiacetona + H2O2
Oxidase
Peroxidase
2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + ESPAS Quinoneimina + 4 H2O
A intensidade da cor vermelha formada é diretamente proporcional à concentração dos Triglicérides na amostra.
Fosfolipidos
SIGNIFICADO CLINICO
Los fosfolípidos son moléculas lipídicas que contienen fosfatos.
Su función como componente principal de las membranas celulares hace de los fosfolípidos un elemento esencial para las células.
La determinación de fosfolípidos en suero es un indicador clínico importante para el diagnostico de alteraciones del hígado, fundamentalmente ictéricas obstructivas.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuente todos los datos clínicos y de laboratorio.
FUNDAMENTO
Los fosfolípidos (combinaciones de lípidos con fosfatos) . Se puede determinar su presencia en sangre por métodos químicos y enzimáticos. Los primeros se basan en la determinación del contenido de fósforo de los fosfolípidos. Los segundos se basan en la hidrólisis de los fosfolípidos y en la posterior determinación de algún producto de la reacción (glicerol, fosfato, etc.)
Fructosamina
SIGNIFICADO CLINICO
Fructosamina es el nombre genérico dado a todas las proteínas glucosilada, de los cuales la mayor parte se debe a la albúmina, que constituye la más grande masa proteica del cuerpo después de la hemoglobina.
Así como la formación de hemoglobina glicosilada se debe a una modificación no enzimatica, dependiente del nivel de glucosa en la sangre, lo mismo sucede con la glucosilación de otras proteínas plasmáticas2. La vida media de las proteínas varía entre 1 a 3 semanas, a diferencia de la hemoglobina, cuya vida media es de 120 días. Por lo tanto, se espera que a medida que el valor de hemoglobina glicosilada refleja el control de glucémia en los 2 meses anteriores a la prueba, la proteína glicosilada refleja las concentraciones de glucosa en plasma en los 20 días anteriores. Por lo tanto, la fructosamina esta elevada en todos los casos de diabetes con control metabólico inadecuado. Cuando se observa la pérdida de control de la glucemia, la respuesta de fructosamina, con un aumento de los valores es casi simultánea a la hiperglucemia, retomando los valores de referencia 3 semanas después de la respuesta al tratamiento. La prueba no sufren interferencias de los medicamentos, la dieta, la glucosa en la sangre del momento y no se observó diferencia significativa entre hombres y mujeres. La disminución de los valores se han observado en pacientes con altas pérdidas de albúmina o enfermedades que aumentan el catabolismo proteico. La prueba no debe ser usado para rastrear la tolerancia a la glucosa, debido a su sensibilidad a los pequeños a una tolerancia a la glucosa oral.
FUNDAMENTO
La glucosa se une a grupos amino de las proteínas que forman una base de Schiff (aldimina), que después de un reordenamiento molecular, se convierte en un ketoamines estable denominados genéricamente frutosamina1. En el pH alcalino de la fructosamina se convierte en la forma enol, lo que reduce el azul nitrotetrazol un "formazán morado. La diferencia en la absorbancia después de incubación a 10 y 15 minutos, es proporcional a la concentración de fructosamina en amostra2. Calibración el sistema se realiza con calibrador de la matriz de la especie bovina, calibrado con polilisina glucosilada. Los resultados se expresan en micromoles por litro (mmol / L).
Electrolitos
Los electrolitos con iones que existen en los líquidos corporales. Los principales cationes en el líquido extracelular con sodio (Na+) y potasio (K+), mientras que los aniones principales con Cl- y HCO3-. El metabolismo resulta afectado por las concentraciones de éstos electrolitos, los cuales determinan la osmolalidad, el estado de hidratación y el pH intra y extracelulares. Además la diferencia de concentraciones intra y extracelular de electrolitos regulan los potenciales de membrana y el funcionamiento normal del tejido muscular y nervioso.
RECOMENDACIONES:Las muestras de fluidos biológicos se deben obtener siguiendo los mismos procedimientos que para cualquier otra prueba de laboratorio. Siempre que sea posible, deben utilizarse muestras de suero, plasma, LCR recién extraídos. No se recomienda el uso de sangre total como muestra. El suero se debe separar inmediatamente después de coagulada la muestra.
Sodio
DEFINICIÓN
El sodio es el principal ión del plasma; por lo que sus máximas concentraciones se hallan a nivel extracelular, este ión se encarga de mantener el equilibrio ácido-base y la presión osmótica, la hiperosmolaridad plasmática induce un desplazamiento de agua del espacio extravascular con la producción de hiponatremia por dilución. Por lo tanto se utiliza en la evaluación del balance ácido-base, el balance hídrico, intoxicación acuosa y deshidratación.
IMPORTANCIA CLÍNICA
Se encuentra aumentado en la hipersecreción de aldosterona y hormona adrenocorticotrópica, insuficiencia renal. Disminuye cuando la secreción de hormona antidiurética es inadecuada, ingesta exagerada de agua, vómito y diarrea.
Potacio
DEFINICIÓN
El potasio es el principal catión intracelular y sólo el 2% corresponde al espacio extravascular. Los riñones excretan entre el 80 y 90% de la cantidad ingerida.
IMPORTANCIA CLÍNICA
Se utiliza en la evaluación del balance electrolítico, especialmente en pacientes con alimentación intravenosa, pacientes con tratamiento diurético, pacientes con falla renal, hemodiálisis o con neuropatías. También es útil en pacientes hipertensos, con acidosis, enfermedades gastrointestinales, debilidad muscular, deshidratación, quemaduras o crisis hemolíticas.
Cloro
DEFINICIÓN
La determinación de cloro en sangre, orina o LCR sirve para hacer una evaluación de nivel de electrolitos, del balance ácido-base, del balance hídrico y cetosis.
IMPORTANCIA CLÍNICA
Generalmente aumenta o disminuye junto con el sodio. Se halla aumentado en deshidratación, diabetes insípida, intoxicación por salicilatos, acidosis tubular renal e insuficiencia renal aguda. Disminuye cuando la ingestión de sal es baja, vómito o diarrea, sudoración excesiva, secreción gástrica persistente, intoxicación hídrica. En LCR los niveles de cloruro son similares a los del suero, pero disminuyen en la meningitis bacteriana
Calcio
IMPORTANCIA CLINICA
El adulto tiene de 1000-1500 gramos de Calcio; de él un 99% se encuentra en el esqueleto. Una parte del calcio plasmático (40%), se encuentra unido a proteínas, un 10% a bicarbonato, citrato ó fosfatos y el 50% restante como Calcio libre iónico, que es el único fisiológicamente activo. La concentración plasmática del calcio total es de 8,5-10,5 mg/ml, pero hay que corregirla en relación a las proteínas totales y mÁs concretamente con los valores de albúmina sérica. También los cambios del pH alteran la unión del calcio con las proteínas: así un HP alcalino aumenta dicha unión produciendo una disminución de la fracción ionizada, mientras que el Calcio sérico total permanece inalterable. También la natremia puede afectar la unión del Calcio con la albúmina: así la hiponatremia menor de 120 mEq/l provoca un aumento del calcio unido a proteínas y la hipernatremia mayor de 155 mEq/l. una disminución.. El metabolismo del calcio está regulado por la hormona paratiroidea (PTH), los metabolitos de la Vitamina D y la Calcitonina. La PTH aumenta el calcio sérico, ya que estimula la resorción ósea, aumenta la reabsorción renal y fomenta la conversión renal de la vitamina D hacia su metabolito activo el Calcitriol. La PTH aumenta la eliminación renal del fosfato. El calcio sérico regula la secreción de PTH a través de un mecanismo de retroalimentación: la hipocalcemia estimula la liberación de PTH mientras que la hipercalcemia la suprime. La vitamina D se absorbe a través de los alimentos y se sintetiza en la piel tras la exposición solar; su metabolito activo el Calcitriol aumenta el calcio sérico; además aumenta la absorción de fosfato por el intestino.
FUNDAMENTO
El calcio reacciona con arsenazo III en medio ligeramente ácido formando el complejo de calcio- arsenazo III de color azul, cuya intensidad es directamente proporcional a la concentración de calcio en la muestra. La absorbancia del producto de reacción se mide en longitudes de onda de 600 o 660 nm.
Fosforo
IMPORTANCIA CLINICA
El fósforo, es esencial para la formación del hueso y el metabolismo energético celular. Un 85% se encuentra en el hueso y la mayor parte del resto dentro de las celulas; solo un 1% está en el liquido extracelular. Por ello los niveles de fósforo sérico no reflejan las reservas de fósforo inorgánico. Se encuentra dentro del organismo en forma de fosfato en una cantidad de 700-800 gr. en el adulto, siendo el anión intracelular de mayor concentración. Es esencial en el metabolismo de los hidratos de carbono, grasas y proteínas. Es substrato necesario para la formación de enlaces de alto nivel energético, del ATP y fosfocreatina, que mantiene la integridad celular, posibilitando la contracción muscular, las funciones neurológicas, la secreción hormonal y la división celular. su concentración sèrica se expresa como masa de fósforo, las cifras normales son entre 3 a 4,5 mg/ml, apreciándose cifras mayores en niños y posmenopáusicas, tendiendo a disminuir algo después de la ingestión de hidratos de carbono y grasas así como durante la alcalosis respiratoria, pudiéndose elevar en los estados de deshidratación, acidosis y tras ejercicio. Con una dieta media se ingiere de 800- a 1200 mg/dia de los que la mayor parte se absorben en el intestino delgado, tanto de forma pasiva como de forma activa dependiente de la vitamina D. La hipofosfatemia aumenta la síntesis de esta vitamina en presencia de hormona de crecimiento. A su vez la vitamina D moviliza fósforo del hueso. La PTH provoca hipofosfatemia ya que, si bien estimula la actividad osteoclástica de los huesos, aumenta la excreción renal de fosfatos al disminuir su reabsorción tubular. La calcitonina produce hipofosfatemia al inhibir la actividad osteoclástica é inducir una mayor eliminación renal de fósforo. La hipercalcemia é hipermagnesemia aguda disminuyen la excreción renal de fosfatos por inhibición de la secreción de PTH. Se debe medir siempre en ayunas.
IMPORTANCIA
El fósforo inorgánico reacciona con el molibdato de amonio en presencia de ácido sulfúrico, resultando en la formación de un complejo de fosfomolibdato no reducido. La absorbancia a 340 nm del complejo formado es proporcional a la concentración de fósforo en la muestra.
Fósforo + H2SO4 + Molibdato de amônio Complexo fosfomolibdato não reduzido
Magnesio
DEFINICIÓN
El magnesio es un nutriente esencial necesario en varias funciones bioquímicas. Tiene un rol estructural en ácidos nucleicos y partículas ribosomales, los cuales son requeridos como activadores para muchas enzimas. Además juega un papel importante en la producción de energía por fosforilación oxidativa.
IMPORTANCIA CLÍNICA
El cuerpo generalmente contiene 21 a 28 g de magnesio, del cual más del 50% es utilizado junto con el calcio y fosfato en los huesos. Aproximadamente el 1% del total de magnesio se encuentra extracelularmente tendiendo a entrar y salir de la célula como el potasio. Aproximadamente el 35% del magnesio plasmático esta en las proteínas, principalmente en la albúmina, lo que genera que al cambiar las concentraciones de estas, se afecte el magnesio.
La hipomagnesemia resulta en alteraciones de la función neuromuscular, en casos de diarrea severa prolongada, síndromes de malabsorcion, hiperaldosteronismo y terapia diurética. La hipermagnesemia sucede en daño glomerular y coma diabético.
FUNDAMENTO
Este método utiliza un arsenazo que se une preferencialmente con el magnesio. La absorbancia para el procesamiento del complejo arsenazo- magnesio es de 572 nm y es proporcional a la concentración de magnesio presente en la muestra. La interferencia del calcio se previene con la incorporación de agentes quelantes de calcio.
Litio
Tanto el litio como el carbonato de litio son utilizados como agentes psicoactivos en el tratamiento de desordenes maniaco depresivos. La terapia con Litio demanda diariamente el monitoreo de los niveles séricos hasta que el esquema de la dósis adecuado sea determinado. Los rangos de la vida media en el suero son de 20-60 horas. Se han descrito casos de insomnio en grupos con dosis bajas. Temblor, síntomas gastrointestinales, frecuencia urinaria, aumento de peso, fueron menos frecuentes en los niveles bajos. La intoxicación nunca ocurre repentinamente. De varios días hasta una semana antes del desarrollo de los síntomas, el paciente puede experimentar letargo, temblor, somnolencia, calambres, disartria, anorexia, vómito o diarrea. Un caso de intoxicación presenta coma o semicoma, rigidéz, reflejos hiperactivos y a veces alucinaciones. Existe una alta incidencia de complicaciones pulmonares, por lo que se aconseja realizar periodicamente determinaciones de sodio séricos. Niveles de sodio bajos están asociados con retención de litio; niveles altos con eliminación de litio. Varios grados de diabetes insipida nefrogénica han sido reportados en el 33% de los pacientes tratados con litio. El litio inhibe significativamente la hormona anti-diurética que induce el transporte de agua en el riñón. Los niveles de litio interfieren con la absorción de solutos y agua del sistema gastrointestinal, produciendo náuseas, vómito, diarrea y dolor abdominal. Estos síntomas puede ocurrir en cualquier momento y con cualquier nivel sérico. La mayor parte ocurre al inicio del tratamiento y generalmente desaparece espontáneamente o por el ajuste de la dósis. La administración crónica de litio tiene un efecto goitrogénico sobre el 4% de los pacientes tratados, con o sin hipotiroidismo. En general, con la administración de litio, los niveles de T4 está levemente disminuídos y se encuentran trascendentalmente elevados los niveles de TSH en aproximandamente 33% de esos pacientes. El litio afecta el sistema de conducción cardiaco por una sustitución incompleta de otros cationes, especialmente sodio y potasio. Estos cambios en los electrolitos son usualmente sin importancia y se observan depresiones reversibles de las ondas T en el 10% al 20% de los pacientes bajo terapia con litio.
Amonio
El amonio circulante en personas normales es relativamente bajo, a pesar del hecho de que el amonio se produce continuamente a partir de la dieta y del metabolismo de los aminoácidos. Las determinaciones séricas de amonio se han utilizado en el diagnóstico de coma asociado con disfunción hepática causada por cirrosis y neoplasmas.
La determinación de amonio es muy útil en el diagnóstico y pronóstico de Síndrome de Reye.
Lactato
Numerosos estudios han demostrado la relación entre el nivel de lactato sérico y el equilibrio entre la disponibilidad (DO2) y el consumo (VO2) de oxígeno tisular1, 2. El Lactato sérico se relaciona también con la capacidad de utilización de oxígeno por parte de la mitocondria, tanto en procesos fisiológicos (ejercicio), como en procesos patológicos (shock, sepsis, etc.)3, 4, 5.
La alteración en el metabolismo del ácido láctico es frecuentemente encontrada en pacientes críticamente enfermos. En esta población, la acidosis láctica es causada por la hipoperfusión sistémica y la hipoxia tisular.
La concentración normal de lactato sérico en personas no enfermas es menor de 1,5 mmol/litro. En pacientes críticamente enfermos se ha propuesto como normal valores <2,2>
DEFINICION
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares sintetizadas en el hígado y distribuidas por todo el organismo. Las proteínas plasmáticas derivan principalmente de la síntesis en el hígado, células plasmáticas, nódulos linfoides, bazo, y médula ósea.
Las proteínas actúan como elementos estructurales y de transporte, aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulación y otros. Las proteínas contribuyen en la regulación de la presión osmótica dentro del espacio vascular, la cual mantiene el líquido dentro de dicho espacio y evita la extravasación. Normalmente la proteína más abundante en el suero es la albúmina.
IMPORTANCIA CLINICA
La hiperproteinemia puede ser observada en casos de deshidratación severa (vómito, diarrea, cetoacidosis diabética), en neoplasias o a un aumento en la concentración de proteínas específicas con inmunoglobulinas como en el caso del mieloma múltiple. La hipoproteinemia puede ser causada por hemodilución (retención de sales o infusión intravenosa) por defectos en la síntesis proteica (malnutrición severa, malabsorción intestinal, enfermedad hepática crónica), síndromes nefróticos, hemorragias excesivas y quemaduras severas.
Los cambios en la proporción de las proteínas plasmáticas puede ocurrir en uno o varias alteraciones de fracciones de proteínas
FUNDAMENTO
Los polipéptidos contienen como mínimo dos péptidos los cuales reaccionan con el reactivo Biuret. En solución alcalina, el cobre metálico forma un complejo con el nitrógeno de la proteína con muy poca diferencia entre albúmina y globulina en bases proteicas-nitrogenadas.
Albumina
IMPORTANCIA CLINICA
La albúmina es la proteína más importante en el plasma humano, lo que representa 40 a 60% de proteína total. Los niveles plasmáticos de albúmina, debido a su relación con la ingesta de proteínas y la producción en el hígado, se utilizan a menudo como un indicador del estado nutricional y la función del hígado.La disminución de la albúmina sérica se presentan en la cirrosis y otras enfermedades del hígado, incluyendo el alcoholismo crónico, el embarazo y se asocia con el uso de anticonceptivos orales en muchas enfermedades crónicas, incluyendo cáncer, síndrome nefrótico, enteropatía perdedora de proteínas (la enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa) , enfermedades inflamatorias, como las enfermedades autoinmunes, la inmovilización prolongada, la insuficiencia cardiaca crónica y otros estados catabólicos.La elevación de la albúmina sérica se encuentra sólo en la deshidratación.
FUNDAMENTO
Albúmina interactúa con verde de bromocresol tamponado y debido al error de proteínas de los indicadores, se forma una coloracion verde, proporcional a la concentración de albúmina en la muestra. El verde de bromocresol tiene una especificidad para la albúmina y no está influida por los altos niveles de bilirrubina y hemoglobina, permitiendo también que las interferencias de los niveles altos de triglicéridos puedan ser corregidos con un blanco de muestra.
Alanina transaminasa (ALT)
DEFINICION
La Alanino Amino Transferasa es una enzima que se encuentra a nivel citoplasmático, en los hepatocitos y en menor proporción en músculo esquelético, corazón, riñón, páncreas y eritrocitos, por lo tanto la destrucción o cambio de permeabilidad en la membrana de estos tejidos provoca la liberación de la enzima a la circulación sanguínea.
IMPORTANCIA CLINICA
Valores elevados de la enzima pueden ser encontrados en hepatitis, mononucleosis, leucemias infantiles, daño extenso del músculo esquelético, miocarditis, ictericia obstructiva, infarto agudo del miocardio, síndrome de Reye, hepatitis viral, septicemia, por fármacos hepatoxicos y cirrosis.
Disminuye ante ejercicio intenso.
Comparando los valores de la ALT con los de la AST es posible determinar el origen hepático o cardiaco de una patología, a demás la relación AST/ALT es útil ya que en las hepatitis necroticas (alcohólicas) este índice generalmente es mayor a uno, mientras que en la hepatitis virales es menor a uno.
Por lo general la mayoría de las elevaciones de ALT están producidas por disfunción hepática.
FUNDAMENTO
ALT presente en la muestra cataliza la transferencia del grupo amino de la L-alanina a alfa-ketoglutarato formando piruvato y L-glutamato. El piruvato en la presencia de NADH y deshidrogenasa láctica, y es reducido a L-Lactato. En esta reacción el NADH es oxidado a NAD. La reacción es monitoreada por evaluación del rango de decrecimiento en absorbancia a 340 nm así como la oxidación de NADH a NAD.
Aspartato transaminasa (AST)
DEFINICION
La Aspartato Amino Transferasa es una enzima bilocular (citoplasmática y mitocondrial), en tejidos como el músculo esquelético, riñón, cerebro y en mayor concentración en hígado y corazón. Cualquier alteración en estos tejidos produce un aumento en los niveles de AST circulante.
IMPORTANCIA CLINICA
En el infarto agudo de miocardio aumenta en forma inespecífica de 5 a 10 veces en un lapso de 6 a 8 horas, alcanzando su máximo nivel a las 48 horas y retornando a la normalidad entre el cuarto y sexto día.
Dado que las AST también existe en las cedulas hepáticas; las enfermedades del hepatocito pueden elevar los niveles de la enzima, afección en la que la AST aumenta en mayor proporción, en especial en procesos necróticos.

FUNDAMENTO
La AST presente en la muestra cataliza la transferencia de una grupo amino de L-aspartato a
-ketoglutarato formando oxalacetato y L-glutamato. El oxalacetato en la presencia de NADH y Malato Deshidrogenasa (MDH) es reducido a L-malato. En esta reacción el NADH es oxidado a NAD. La reacción es monitoreada por evaluación del rango de decrecimiento en la absorbancia a 340 nm así como la oxidación del NADH a NAD.
Gama glutamil transferasa (GGT)
IMPORTANCIA CLINICA
Los niveles de GGT se elevan en enfermedades hepáticas o pancreáticas que obstruyen el colédoco pero son siempre normales en el embarazo y las osteopatías. En los procesos colestásicos, sus niveles evolucionan paralelamente a los de la fosfatasa alcalina y la 5’-nucleotidasa. Dado que las elevaciones durante el embarazo o niñez nunca serán fisiológicas, su determinación ocupa un lugar destacado en la detección de la patología “hepatobiliar”. Los fármacos y el consumo de alcohol, que inducen las enzimas microsomales, también elevan sus niveles. Sin embargo, si la elevación es aislada, es un marcador poco fiable de la hepatopatía alcohólica. Su valor para detectar la hepatopatia alcohólica aumenta si se le combina con las determinaciones de aminotransferasas (transaminasas), la determinación de esta enzima está reemplazando a la 5’-nucleotidasa para confirmar el origen hepatobiliar de una elevación aislada de la fosfatasa alcalina.
FUNDAMENTO
A g-Glutamil Transferase catalisa a transferência do grupamento Glutamil da L-g Glutamil-p-nitroanilide para a glicilglicina, formando- g Glutamilglicilglicina e p-nitroanilina segundo a reação seguinte:
GGT
L-g-Glutamil-p-nitroanilide + Glicilglicina Glutamilglicilglicina + p-nitroanilina.

A quantidade de p-nitroanilina liberada, que tem elevada absorbância em 405 nm, é diretamente proporcional à atividade da GGT na amostra.
Fosfatasa alcalina
DEFINICION
La fosfatasa alcalina es una hidrolasa con muy poca especificidad de sustrato, que se localiza en la membrana celular. Se encuentra presente en casi todos los tejidos del cuerpo, especialmente en epitelio intestinal, túbulos renales, hueso, hígado y placenta. La actividad sérica ósea en condiciones normales alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento. Fisiológicamente también se encuentra aumentada durante el primer trimestre del embarazo.
IMPORTANCIA CLINICA
Su aplicación clínica está en relación con la enfermedad hepática obstructiva, tumores hepáticos, cirrosis y en enfermedades metabólicas óseas.
FUNDAMENTO
Varios sustratos han sido utilizados para determinar la actividad de la fosfatasa alcalina como el glicerolfosfato, el fenil fosfato y el p-nitrofenil fosfato, también se han incluido determinaciones cinéticas que optimizan el método donde se incluye buffer con iones metálicos como Zinc, Magnesio y EDTA.
La fosfatasa alcalina de la muestra cataliza la hidrólisis de sustrato p-nitrofenil fosfato (p-NPP) para dar p-nitrofenil y fosfato inorgánico. A pH alcalino el p-nitrofenil se convierte en una forma de fenóxido amarillo. El rango de absorbancia incrementa a 404 nm y es directamente proporcional a la actividad de la fosfatasa alcalina en la muestra.
Bilirrubina total
DEFINICION
Los glóbulos rojos hacia el fin de su período de circulación son destruidos en el sistema reticuloendotelial y en el baso. El resultado es la formación de las moléculas heme y globina, pues el hierro es removido, y el heme se convierte en bilirrubina. Este proceso aporta un 80% de 500 umol (300 mg) de bilirrubina que son formados durante el día. Otro origen de la bilirrubina incluye el rompimiento de mioglobina y citocromos y el catabolismo de glóbulos rojos inmaduros en la médula ósea.
Una vez formada la bilirrubina es transportada al hígado y en unida a la albúmina y es insoluble en agua, esta fracción de bilirrubina es conocida como indirecta o no conjugada. El hígado, la bilirrubina es conjugada a ácido glucorónico (mono y di glucoronidos) para así formar la bilirrubina conjugada gracias a la acción de la enzima uridil fosfato glucoronil transferasa. La bilirrubina conjugada o bilirrubina directa es excretada por la vía biliar al intestino, donde es metabolizada por las bacterias a un grupo de productos conocidos como estercobilinogeno. La eliminación es casi completa y los niveles séricos son normalmente no detectables.
IMPORTANCIA CLINICA
La bilirrubina total es elevada en condiciones que causan obstrucción hepática, hepatitis, cirrosis, desordenes hemolíticos y deficiencias enzimáticas.
FUNDAMENTO
El método tradicional de detección de bilirrubina esta basada en la reacción de ésta con un diazo compuesto, para formar el componente coloreado conocido como azobilirrubina. La reacción, puede ser acelerada con la adicción de varios químicos, por ejemplo, metanol, cafeína y dimetil sulfoxido (DMSO). Las modificaciones de estos métodos incluyen la adicción de surfactantes como agentes solubilizantes.
La bilirrubina total (conjugada y no conjugada) se une al diazo compuesto en la presencia en presencia de un surfactante para formar azobilirubina. El incremento en la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de bilirrubina total.
Bilirrubina directa
DEFINICION
Los glóbulos rojos hacia el fin de su período de circulación son destruidos en el sistema reticuloendotelial y en el bazo. El resultado es la formación de las moléculas heme y globina, pues el hierro es removido, y el heme se convierte en bilirrubina. Este proceso aporta un 80% de 500 umol (300 mg) de bilirrubina que son formados durante el día. Otro origen de la bilirrubina incluye el rompimiento de mioglobina y citocromos y el catabolismo de glóbulos rojos inmaduros en la médula ósea.
Una vez formada la bilirrubina es transportada al hígado y en unida a la albúmina y es insoluble en agua, esta fracción de bilirrubina es conocida como indirecta o no conjugada. El hígado, la bilirrubina es conjugada a ácido glucorónico (mono y di glucoronidos) para así formar la bilirrubina conjugada gracias a la acción de la enzima uridil fosfato glucoronil transferasa. La bilirrubina conjugada o bilirrubina directa es excretada por la vía biliar al intestino, donde es metabolizada por las bacterias a un grupo de productos conocidos como estercobilinogeno. La eliminación es casi completa y los niveles séricos son normalmente no detectables.
IMPORTANCIA CLINICA
La bilirrubina directa se encuentra aumentada cuando existe obstrucción del árbol biliar en entidades como colangitis, colelitiasis, colecistitis, tumores hepáticos y tumores pancreáticos. También se ve aumentada en daño hepatocelular (hepatitis viral), colestasis. Síndromes de Dubin Johnson y síndrome de Roto, y en procesos de insuficiencia hepática (hepatitis tóxica, cirrosis y necrosis hepática.
FUNDAMENTO
La determinación de la bilirrubina esta generalmente basada en la reacción de bilirrubina con ácido sulfanílico diazotado. En este método, la bilirrubina directa (fracción conjugada) se une a la sal diazonica presente en el ácido sulfamico para formar un compuesto coloreado conocido como azobilirrubina. El incremento en la absorbancia a 548 nm así como la azobilirrubina es proporcional a la concentración de la bilirrubina directa.
Fosfatasa acida
IMPORTANCIA CLINICA
Los niveles séricos elevados de fosfatasa ácida prostática se encuentran en los pacientes con cáncer de próstata. Los datos publicados muestran que alrededor de 5 a 10% de los pacientes con cáncer de próstata en estadio B tienen niveles séricos elevados de la fracción de la próstata. Este porcentaje aumenta a 20 a 25% en la etapa C hasta alcanzar el 75 al 90% en estadio D. Exacerbaciones y remisiones de adenocarcinoma de próstata no se correlaciona necesariamente con los niveles de fosfatasa ácida. Ocasionalmente, se observan los niveles de fosfatasa ácida en los límites de referencia en los pacientes con carcinoma de próstata extenso. La determinación de fosfatasa ácida prostática es también útil para evaluar la respuesta a Estrogenoterapia y el seguimiento postoperatorio. Los pacientes con hipertrofia benigna de próstata (2 a 10%) o con infarto de la próstata pueden tener un poco de isoenzimas séricas elevadas de próstata.
Se han registrado aumentos de hasta 48 horas después de un masaje de la próstata y en pacientes que sufren de estreñimiento debido al masaje de la próstata realizado por la materia fecal. Los individuos con metástasis óseas extensas de cáncer no próstatico con la enfermedad de Gaucher, de Paget, el hígado y la trombocitosis pueden presentar niveles elevados de fosfatasa ácida utilizando timolftaleina sustrato.
FUNDAMENTO
La fosfatasa ácida en sueroactua sobre el sustrarto monofosfato timolftaleina . La adición de álcali inhibe la actividad enzimática y convierte la timolftaleina liberada en su forma azul, que se mide colorimétricamente. El producto final de esta reacción es una mezcla de azul y el color del sustrato.
Creatinfosfokinasa (CPK)
DEFINICIÓN
La creatinkinasa es una enzima intracelular. Se encuentra en el músculo esquelético, músculo cardiaco y cerebro. Un aumento de su actividad es índice de lesión celular, la extensión y gravedad determinará la magnitud de su elevación, por lo cual es muy útil en la elevación de daños musculares. La CK total tiene tres isoenzimas: CK MM (muscular), CK bb (cerebral) y CK MB (miocardio).
IMPORTANCIA CLÍNICA
La CK total aumenta con actividad física vigorosa, traumas esqueléticos o distrofia muscular. En infarto agudo del miocardio aumenta entre las 2 y 6 horas del episodio, alcanza su máximo nivel después de 18 a 24 horas y se normaliza a las 48 horas. Su concentración aumenta en infarto agudo del miocardio, accidentes cerebro-vasculares, descarga eléctrica, convulsiones, distrofia muscular, alcoholismo crónico e infarto pulmonar.
FUNDAMENTO
A creatina quinase total é determinada de acordo com as seguintes reações:
CK
Creatina Fosfato + ADP Creatina + ATP
HK
ATP + Glicose ADP + Glicose-6-Fosfato
G-6-PDH
Glicose-6-Fosfato + NAD 6-PG + NADH
A CK catalisa a reação entre creatina fosfato e adenosina difosfato (ADP), formando creatina e adenosina trifosfato (ATP). O ATP fosforila a glicose sob a ação da hexoquinase (HK), formando glicose-6-fosfato, que é oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) na presença de NAD, por ação catalítica da glicose-6-fosfato desidrogenase (G-6-PDH). Uma quantidade equimolar de NAD é reduzida a NADH, aumentando a absorbância em 340 nm, proporcionalmente à atividade da CK na amostra.
Creatinfosfokinasa MB (CPK-MB)
IMPORTANCIA CLINICA
Es importante discriminar entre CK-MB y CK-MM, af in de realizar un buen diagnóstico diferencial entre daño del músculo esquelético o del miocardio. La determinación de CK-MB elevada es más de un 20% del valor de CK total corresponde a un marcador de infarto agudo de miocardio. La cifras de CK-MB no suelen aumentar cuando el dolor toráxico se debe a angina, embolismo pulmonar o insuficiencia cardíaca congestiva. Dado que esta izoenzima se encuentra predominantemente en cerebro y pulmón, la lesión de uno de ellos (accidentes cerebro vascular o infarto pulmonar) se asocia con niveles elevados de la misma.
El nivel de CK-MB es útil para cuantificar el grado de infarto de miocardio y para establecer su comienzo, es decir, que altos niveles de esta sugieren un infarto grande y por tanto el tratamiento trombolitico apenas será útil.
FUNDAMENTO
A amostra de soro é incubada com o reagente de trabalho da CK-MB que contém um anticorpo específico para a subunidade CK-M e que inibe completamente a atividade enzimática do monômero CK-M. A atividade do monômero CK-B, que não é inibida pelo anticorpo, é medida pela seguinte sequência de reações:
CK-B
Creatina Fosfato + ADP Creatina + ATP
HK
ATP + Glicose ADP + Glicose-6-Fosfato

G-6-PDH
Glicose-6-Fosfato + NAD 6-PG + NADH

A CK-B catalisa a reação entre creatina fosfato e adenosina difosfato (ADP), formando creatina e adenosina trifosfato (ATP). O ATP fosforila a glicose sob a ação da hexoquinase (HK), formando glicose-6-fosfato, que é oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) na presença de NAD, por ação catalítica da glicose-6-fosfato desidrogenase (G-6-PDH). Uma quantidade equimolar de NAD é reduzida a NADH, aumentando a absorbância em 340 nm, proporcionalmente à atividade da CK-B na amostra.

Lactato deshidrogenasa (LDH)
DEFINICION
La Lactato Deshidrogenasa es una enzima intracelular que se encuentra en la mayoria de los tejidos corporales, pero en mayor proporción en corazón, hígado, riñones, músculo esquelético, cerebro, hematíes y pulmones.
La LDH en una enzima tetramerita que consiste en dos subunidades. Al realizar electroforesis de la enzima se observan cinco isoenzimas, los radios relativos de dichas isoenzimas varían con el tejido en el cual se encuentren.
LDH-1 procede de corazón y vasos sanguíneos
LDH-2 del sistema reticuloendotelial
LDH-3 de los pulmones
LDH-4 del riñón, placenta y páncreas
LDH-5 del hígado y el músculo estriado.
IMPORTANCIA CLINICA
Los niveles séricos de esta enzima están elevados en un amplia variedad de condiciones patológicas, dentro de las más importantes están la enfermedad cardiaca y la hepática.
Cuando la LDH-1 es mayor que la LDH-2 se evidencia infarto agudo de miocardio. La LDH se empieza a elevar entre 12 y 24 horas, alcanza su pico entre 48 y 72 horas y permanece elevada hsta el décimo día.
Se halla además elevada en mononucleosis infecciosa, tumores malignos, linfomas, anemias, distrofias musculares y pancreatitis.
FUNDAMENTO
A atividade da LDH é determinada de acordo com a seguinte reação:
LDH
Piruvato + NADH + H Lactato + NAD
A LDH catalisa a conversão do piruvato a lactato na presença de NADH. O decréscimo da absorbância em 340 nm, devido a oxidação do NADH, é proporcional à atividade da LDH na amostra.
Amilasa
DEFINICIÓN
La mayor cantidad de la amilasa se encuentra en las glándulas parótidas y en el páncreas. La amilasa es segregada normalmente por la célula acinar pancreática en el conducto pancreático y después del duodeno, una vez en el intestino contribuye en la digestión de carbohidratos.
IMPORTANCIA CLÍNICA
El daño a las células acinares (pancreatitis o la obstrucción del flujo del conducto pancreático (cáncer pancreático) causarán la extravasación de la enzima al sistema linfático y la cavidad peritoneal. La amilasa pancreática diferencia entre pancreatitis aguda y crónica, ya que en la primera se aumenta en las primeras 24 horas y se normaliza entre dos y seis días. Debido al aumento sérico la amilasuria también aumenta y persiste hasta cinco días después de que la actividad en suero se normaliza: los valores aumentados que persisten por más tiempo sugieren una necrosis o la formación de pseudoquistes. Se Eleva también en las parotiditis; obstrucción intestinal; embarazo ectópico, peritonitis, úlcera gástrica.
Aunque la amilasa sérica es una prueba sensible para trastornos pancreáticos no es específica. Otras enfermedades no pancreáticas pueden aumentar la amilasemia, por ejemplo en una perforación intestinal o una úlcera péptica.
FUNDAMENTO
La muestra es incubada con um sustrato de almidón y la reducción del color azul, después de la adición del yodo, se compara con un control, siendo proporcional a la actividad de la amilasa en la muestra.
Lipasa
IMPORTANCIA CLINICA
El páncreas constituye el origen principal y primario de la lipasa sérica. La lipasa pancreática humana es una glucoproteína, con un peso molecular de 45.000 daltons. Al contrario que la amilasa, que se encuentra tanto en el páncreas como en las glándulas salivales, la lipasa no se encuentra en las glándulas salivales. La lipasa también se encuentra en el hígado, estómago, intestino, leucocitos, células adiposas y leche.
La actividad lipasa sérica tiende a encontrarse elevada aproximadamente en el mismo momento, si no antes, que la elevación de la arnilasa sérica en la pancreatitis aguda y permanece elevada durante un período mucho más prolongado, de alrededor de 7 a 10 días.
Ventrucci mencionó una sensibilidad diagnóstica del 100 % y una especificidad del 97 % para la lipasa sérica en la pancreatitis aguda. En la pancreatitis, la lipasa sérica tiende a mostrar mayores incrementos de actividad que la amilasa. Los pacientes con traumatismos del abdomen presentan paralelamente un aumento de la amilasa y de la lipasa séricas, mientras que los pacientes con un traumatismo craneal o manipulación de la glándula parótida durante la cirugía presentan un aumento significativo sólo de la amilasa sérica. La elevación de la actividad lipasa sérica en pacientes con parotiditis sugiere firmemente un compromiso significativo tanto pancreático como de la glándula salival por la infección.
En muchos pacientes con inflamación u otras alteraciones de órganos de la cavidad abdominal, pero sin pruebas de pancreatitis, la amilasa y la lipasa sérica se elevan. Se ha concluido que el páncreas debe ser muy sensible a las alteraciones inflamatorias o metabólicas de los órganos vecinos.
FUNDAMENTO
La lipasa actúa hidrolizando esteres de glicerol de ácidos grasos de cadenas largas (triglicéridos) en diglicerios, monogliceridos y ácidos grasos libres. Durante la reacción el sustrato en medio tamponado y estabilizado, adquiere una fase emulsificada formando interfases necesarias a la acción de lipasa que en presencia de acido ditionitrobenzoico (DTNB) forma una cromógeno de color amarillo proporcional a la actividad de lipasa en suero.
Mucoproteinas
IMPORTANCIA CLINICA.
El mucoproteínas son una fracción heterogénea de glicoproteínas solubles que pueden ser separados por electroforesis en 5 fracciones, conocido genéricamente como proteínas de fase aguda. Por definición proteínas de fase aguda es aquella cuya concentración aumenta o disminuye en respuesta a estímulos inflamatorios. La mayoría realiza funciones específicas o que los hace muy importante durante el proceso inflamatorio.El aumento de la mucoproteínas ocurre en muchos procesos inflamatorios sépticos o asépticos, agudos o crónicos, localizados o sistémicos como neoplasias, enfermedad vascular del colágeno, la tuberculosis y otras enfermedades infecciosas, la diabetes mellitus, la cirrosis hepática, la psoriasis, gota, etc. La falta de especificida limita en gran medida su uso en el diagnóstico. Las medidas seriadas de mucoproteínas se han utilizado con cierto éxito para monitorizar la respuesta al tratamiento. Recuerde que no hay correlación entre mucoproteínas suero, la proteína C-reactiva y antiestreptolisina.
FUNDAMENTO
Las mucoproteínas son separadas de las proteínas coagulables por precipitación selectiva con solución de ácido perclórico. A continuación, la precipitación de mucoproteínas del filtrado con ácido fosfotúngstico y la determinación con el reactivo Folin-Ciocalteau a través del contenido en tirosina.
Alcoholemia
IMPORTANCIA CLINICA
El alcohol etílico es uno de los parámetros más analizados en los laboratorios forenses y de toxicología clínica. La determinación del alcohol etílico se emplea en el diagnostico y tratamiento de la intoxicación por alcohol.
FUNDAMENTO
Las primeras técnicas de determinación del alcohol en sangre empleaban la destilación, aeración o difusión para separar el alcohol de la matriz plasmática. El alcohol destilado se determinaba entonces oxidándolo mediante oxidantes muy potentes. Sin embargo, la especificidad de estos métodos era escasa, ya que en la destilación se podía se podían introducir otros componentes oxidables que reaccionaran entonces en la mezcla reactiva. Existen diferentes procedimientos aceptables, tales como la cromatografía de gases y los métodos osmometricos. La técnica enzimática empleada en el laboratorio, basada en una información publicada por Bucher y Redetski, es a la vez específica y fácil de realizar.
Pruebas serológicas:
1. Hemaglutinacion indirecta para Chagas (HAI Chagas)
2. Hemaglutinacion indirecta para toxoplasmosis (HAI Toxo)
3. Proteina C reactiva (PCR)
4. Factor reumatoideo (RA)
5. Antiestreptolisina (ASTO)
6. Hormona corionica Gonadotrifina subunidad beta (HCG-β)
7. Laboratorio de referencia de enfermedades venéreas (VDRL)
8. Reagina plasmática (RPR)
9. Reaccion de Widal
10. Reaccion de Hudlleson
11. Reacion de Weil felix
12. Monotest
Preguntas de revisión
1. ¿Indique la diferencia principal entre colorímetro y espectrofotómetro?
2. ¿Cuándo se encuentra aumentada la actividad de una enzima en suero?
3. ¿Qué variables no añudan a determinar la actividad enzimática en suero?
4. La actividad enzimática se expresa en unidades internacionales ¿Cómo definiría las unidades internacionales?
5. ¿Explique las tres fases que se dan en una reacción enzimática y en cual de ellas es valida la determinacion enzimática y por que?
6. ¿Explique los métodos analíticos para determinar la actividad enzimática?
7. ¿Son importantes las condiciones de los reactivos(Ph, temperatura,ect) y la condición de la muestra a la hora de determinar actividad enzimática en suero. Explique por que?
8. Ademas de la glucosa para que otros metabolitos nos es útil la determinación enzimática de sustratos?
9. ¿Según su criterio que pruebas ingresarían en los diferentes perfiles y por que (explique)?
· Perfil renal
· Perfil hepático
· Perfil cardiaco
· Perfil bioquímico

110 comentarios:

  1. hola daniel tu trajao esta muy bien no te parece que esta muy largo es parael año??

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  2. ricardo vaca: ya estamos en las ultimas

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  3. hola nuevamente me alegra que solo sean 9 preguntas

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  4. hola nuevamente ,mejor vamos a la picina y hacemos la tarea la otra semana

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  5. hola daniel, esta larguito el trabajo.

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  6. hola de nuevo, sigo leyendo y esto no se acaba.

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  7. esta muuuuuyyy laaaaaaarrrrrrgo, ya me dio flojera :)

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  8. alguien hizo el cuestionario???? si tienen el de hemato tb me sirve!!!!

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  9. y cuando es la clase??????el proximo mes????:)

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  10. hola chicos estudiemos, porque esta largo

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  11. La hora que aparece en el comentario esta mal. Son las 19:30 no las 15:30... Saludos a todos...

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  12. por que no lo suspenden??????? por fa....

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  13. por favor postergenlo las clases si......

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  14. HUMBERTO FUE A LA EXPO DEL HOSPITAL DE NIÑOS

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  15. a leer con calma, para que el esfuerzo que pone cada expositor,sea bien aprovechado

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  16. Si cada area popne su mejor esfuerzo, los pacientes y medicos, son beneficiados

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  17. holaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa

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  18. hola,porfa procuren que las clases no sean entre semana

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  19. para mi es dificil asistir,qunque se que estamos en lo ultimo

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